D&P Biotech

qPCR

• qPCR은 Thermal Cycler와 분광 형광 광도계가 일체화된 장치를 이용하는 방식으로, PCR 증폭산물의 생성과정을 실시간 모니터링하여 Target DNA의 양을 분석하는 기술로써, End Point에서 증폭량을 확인하는 기존 PCR법에 비해 다양한 장점을 가지고 있습니다.
  • DNA의 정확한 정량 가능
  • 전기영동 필요 없음
  • 낮은 오염 위험
• 높은 반응성과 재현성을 가진 Applied Biosystems사의 AB7500을 사용한 분석서비스를 제공해 드립니다.

qPCR vs qRT-PCR 비교

서비스 단계

• 의뢰하신 유전자에 대한 정보를 가지고 있지 않아도 유전자 조사, Primer/Probe 디자인, 핵산 추출, 염기서열 분석, 유전자 검출 및 정량을 진행하여 고객이 원하는 맞춤형 결과 보고서를 제공해 드립니다.

• 서비스 단계

  단계	Type
  Target gene	Human, Mouse/Rat, Bacteria/virus/fungi specific gene
  Oligo design	Primer/Probe design
  Specimen	Whole Blood, Plasma, Serum, Swab, Sputum, Bronchoalveolar lavage, Stool, Urine, Tissue, Liquid based cytology
  핵산 Prep.	검체로부터 Total DNA 추출
  Amplification	SYBR Green I TaqMan probe
  Analysis	Absolute Quantification Relative Quantification Qualitative Analysis
  Report	고객 맞춤형 결과 보고서 작성

• 원하시는 단계부터 의뢰가 가능합니다.
• 원하시는 추출 방법 및 kit로 핵산 Prep. 가능합니다.
• Intercalator를 이용하는 방법 (SYBR GreenⅠ): Intercalator법은 일반적으로 SYBR GreenⅠ을 사용합니다. Intercalator는 PCR에 의해 합성된 double strand DNA에 결합해 형광을 발합니다. 이 형광 강도를 측정함으로써 증폭 산물의 생성량을 측정할 수 있습니다.
• 형광 표지 probe (TaqMan probe): TaqMan probe는 PCR 산물의 특정부분에 대하여 5‘ 말단을 형광물질로, 3’ 말단을 quencher 물질로 결합한 oligonucleotide입니다. Taq DNA polymerase가 가지고 있는 5’→3‘ exonuclease 활성에 의해, 주형에 hybridization한 TaqMan probe가 분해되면 형광물질이 probe로부터 분리되어 quencher에 의한 억제가 해제되고 형광을 발하게 됩니다.

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• SYBR Green vs TaqMan probe

• 서비스 단계

  내용	SYBR Green	TaqMan Probe
  원리	SYBR green염료 사용 (dsDNA 결합 염료)	Target specific 형광 probe
  Sensitivity	가변적*	Low copies (10~100 copies/rxns)
  Specificity	보통	높음
  Reproducibility	보통	높음
  Multiplex	불가능	가능
  가격	상대적 저가	상대적 고가
  Application	정량 분석 정성 분석	정량 분석 정성 분석 SNP 유전형 분석 복제 수 변이 Human Mutation 분석

• * qPCR 조건에 따라 변동이 심함
• Analysis (Quantitation Analysis)
  • 절대정량 (Absolute Quantitation) : 농도가 확인된 Standard curve Positive Control (SPC)를 기준으로 Target DNA의 증폭량을 정량하는 방법으로, qPCR 진행 시 Standard curve를 필요로 합니다.
  • 상대정량 (Relative Quantitation) : 특정 조건에 의해 비교군의 유전자가 대조군에 비해 변화 또는 차이를 확인하는 방법으로, qPCR 진행 시 reference gene을 필요로 합니다.

결과 해석

• 결과보고서는 PDF파일 형태로 이메일로 발송됩니다.
• 원하시면 Paper support, Reference 조사, Raw data도 제공해 드립니다(고객 맞춤형 결과 보고서 작성).

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서비스 종류

• 원하시는 실험 디자인 및 연구지원서비스 완료 후 동일한 서비스를 추가 의뢰하실 경우 비용 할인을 적용 받으실 수 있습니다.
• 원하시는 실험 수량이 많을 경우 비용 할인을 적용 받으실 수 있습니다.

샘플 준비

• 문헌 조사, Oligo design이 필요하신 경우 담당자에게 충분한 정보를 제공바랍니다.
• 검체 추출이 필요하신 경우 200ul 이상의 양을 충분한 아이스팩에 넣으신 후 택배 착불로 보내주십시오.
• 검체 종류에 따라 필요한 양이 다르므로 사전에 시험 담당자와 상의하시기 바랍니다.
• 추출한 DNA를 보내실 경우, 10ng/ul 농도 30ul 이상의 양을 충분한 아이스팩 또는 드라이아이스를 포함한 아이스박스에 잘 포장하신 후 택배 착불로 보내주십시오.

분석 시간

• 샘플 수령일로부터 4주~6주 소요 (분석 소요일 : 2주/프로브 주문 2~4주 포함)